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Tween20在线播放_tween20是什么(2024年12月免费观看)

内容来源：奇优电影院所属栏目：导读更新日期：2024-12-01

Tween20

WB实验全攻略：从准备到结果解读 𐟓š𐟔젥ꌥ‡†备试剂清单：分离胶、浓缩胶 SDS loading buffer（还原型，5x）电泳缓冲液电转缓冲液封闭液 TBST/PBST洗膜液抗体预染的 Protein Marker ECL化学发光试剂仪器设备： -20Ⰳ低温冰箱 BIO-RAD垂直板电泳转移装置或NOVEX iBlot蛋白快速电泳/干转印系统多用脱色摇床耗材与杂品：各种规格的吸头、离心管和加样器烧杯、量筒和平皿等玻璃器材 PVDF膜（0.22/0.45，根据分子量大小而定）滤纸、手套、搪瓷盘（>20x20cm）滚轮、计时器、吸水纸等 𐟧갟“ 试剂配制 TBST： TBS(10x) 100mL + 纯水 900mL + Tween20 5mL PBST： PBS(10x) 100mL + 纯水 900mL + Tween20 5mL 𐟖寸𐟓Š 实验步骤样品处理：提取蛋白质，加入SDS loading buffer，进行电泳。电泳：在BIO-RAD垂直板电泳转移装置或NOVEX iBlot蛋白快速电泳/干转印系统上进行。转膜：将分离的蛋白质转移到PVDF膜上。封闭：用封闭液封闭膜上的非特异性结合位点。抗体孵育：加入一抗和二抗，进行孵育。显色：使用ECL化学发光试剂进行显色，获取图像。结果解读：根据显色结果，分析蛋白质的表达情况。

四种缓冲液配方，一文秒懂！ 𐟔 主要用途 𐟔 相同点与不同点 𐟔 应用小技巧 𐟌Ÿ 每1000ml配方： 𐟌🠔BS (Tris-Buffered Saline) 配方：6.05克 Tris base，85.0克氯化钠 (NaCl)，用HCl调整pH值至7.4-7.6 𐟌🠔BST (Tris-Buffered Saline with Tween-20) 配方：与TBS相同，加上1ml Tween-20 𐟌🠐BS (Phosphate-Buffered Saline) 配方：1.42克磷酸二氢钠 (NaH2PO4)，8.77克磷酸氢二钠 (Na2HPO4)，90.0克氯化钠 (NaCl)，用NaOH调整pH值至7.2-7.4 𐟌🠐BST (Phosphate-Buffered Saline with Tween-20) 配方：与PBS相同，加上1ml Tween-20 （增强型TBST缓冲液增加了新型抑菌剂和防腐剂）

TBST和PBST的区别及配制方法 𐟧ꥮž验室小白的笔记 TBST和PBST的区别 TBST是TBS加Tween-20的缩写，而PBST则是PBS加Tween-20。两者的区别主要在于pH值和用途。 1. pH值变化：TBST的pH值随温度变化较大，而PBST容易有沉淀。如果需要反复使用抗体，建议使用TBST，因为它更稳定。洗液效果：两种洗液在洗脱蛋白时效果相似，都能提供稳定的pH环境，并有助于蛋白的洗脱。PBST是基于磷酸盐缓冲液，而TBST是基于Tris缓冲液。 TBS缓冲液 TBS缓冲液是生物学中常用的等渗缓冲盐溶液，主要用于免疫组化、原位杂交和酶联免疫等实验中，清洗免疫印迹实验中非特异性结合的抗体等。它的配方（1X浓度）包括：1L的10X PBS缓冲液（1.37 M NaCl, 27 mM KCl, 100 mM Tris, pH 7.4），加入0.1%的Tween-20（1 mL/L PBS），再补足至1L以获得最终浓度。配置步骤如下：首先，用蒸馏水稀释10X PBS至1X，再加入Tween-20，混合均匀后过滤或离心去杂质。最后，分装到无菌瓶中，存放在4℃的阴凉处，避免反复冻融。 PBS缓冲液 PBS缓冲液是指磷酸缓冲液（Phosphate Buffer Solution），渗透压近似于生理条件又有很强的pH缓冲能力，常用来洗细胞（不易涨裂）和作为细胞培养的基础液（pH缓冲）。它的配方为10X PBS（1.37 M NaCl, 27 mM KCl, 100 mM Na2HPO4, 18 mM KH2PO4, pH 7.4），稀释至1X后加入0.1% Tween-20。与TBST相似，配制后过滤，分装并保存在适宜条件下。总结 TBST和PBST在实验室中都有广泛的应用，但它们在pH值和用途上有所不同。选择哪种洗液取决于你的具体实验需求。希望这些信息对你有所帮助！

BST不宜高压灭菌：防止吐温20起昙现象的有效方法 TBST（Tris-Buffered Saline with Tween 20）是一种常用的生物化学缓冲液，在Western blot等实验中用于洗涤膜上的非特异性结合物质。 TBST中含有Tween 20，这是一种非离子型表面活性剂，具有增溶和乳化的作用。然而，Tween 20在高压灭菌过程中可能会出现起昙现象，这是由于Tween 20中的疏水基团与水分子之间的氢键缔合在高温下被破坏，导致相分离。这种现象可能会影响TBST的性能和使用效果。为了防止Tween 20在TBST中起昙，可以采取以下有效方法： 1.过滤除菌：使用0.22微米的微孔滤膜对TBST进行过滤除菌。这种方法可以避免高温对Tween 20的影响，同时保证TBST的无菌状态。需要注意的是，Tween 20本身比较粘稠，高浓度时可能不好过滤。因此，在过滤前可以将TBST适当稀释，以降低Tween 20的浓度，提高过滤效率。 2.无菌操作：在配制和使用TBST时，严格遵守无菌操作规程，避免污染。使用无菌的容器和器具，确保整个操作过程的无菌性。 3.避免高温处理：尽可能避免对TBST进行高温处理，如高压灭菌等。如果确实需要对TBST进行灭菌处理，可以考虑使用其他非高温的灭菌方法，如紫外线灭菌或化学灭菌（但需注意化学灭菌剂对TBST成分的影响）。 4.质量控制：在配制TBST时，严格控制各成分的比例和浓度，确保TBST的质量和稳定性。定期对TBST进行质量检测，包括无菌检测、pH值检测等，以确保其符合使用要求。综上所述，为了防止Tween 20在TBST中起昙，建议采用过滤除菌的方法对TBST进行灭菌处理。同时，在配制和使用过程中严格遵守无菌操作规程，避免高温处理，并进行质量控制以确保TBST的质量和稳定性。这些方法可以有效防止Tween 20的起昙现象，保证TBST在生物化学实验中的正常使用效果。 #广州华韵生物科技有限公司#

免疫沉淀实验常见问题及解决方案𐟧ꊥ…疫沉淀(IP)是一种用于纯化和富集目标蛋白的技术，在蛋白质组学研究中常用于识别蛋白质与蛋白质之间的相互作用。以下是免疫沉淀实验中常见的一些问题及其解决方案，希望对大家的实验有所帮助。 𐟌Ÿ背景高样本中有不溶蛋白残留：离心后应立即取出上清。洗涤不充分：优化洗涤缓冲液，通过加入去垢剂（如0.5-1% NP-40/Triton X-100/Tween-20）或增加盐离子浓度（如250mM NaCl/1-2mM DTT/ME），增加洗涤时间和次数来提高洗杂效率。非特异蛋白与磁珠结合：磁珠用BSA预封闭不充分，确保BSA新鲜，将磁珠和1% BSA孵育1小时，使用前PBS洗涤3-4次。抗体特异性不好：使用亲和纯化的抗体。抗体用量太多：尝试使用更少的抗体。裂解液中蛋白含量太高：减少样本用量。蛋白和抗体非特异结合：在免疫沉淀之前预先将磁珠和样本孵育，清理样本中可以和磁珠结合的成分，一些研究人员也使用同型对照来预清理裂解液。 𐟌Ÿ没有检测到目的蛋白洗脱样本中目的蛋白不表达或低水平表达：如果表达水平低，需要增加裂解液用量，但也可能导致非特异结合的增加，所以在免疫沉淀之前需要预先清除裂解液。抗体用量不够：检查抗体用量，提高使用量。目标蛋白没有从磁珠上洗脱：需要确保使用的洗脱缓冲液正确。抗体没有结合磁珠：确保使用的磁珠和抗体亚型匹配，磁珠正确保存，防止变质或干燥。裂解液中盐碱度太高：改用低盐碱度裂解液，一般可选NP-40, RIPA, western及IP细胞裂解液。 𐟌Ÿ加样顺序对靶蛋白得率的影响磁珠、抗体、抗原样本混合一起孵育：速度最快，但靶蛋白纯度和得率会很低。间接法：抗体和抗原样本先结合，再加入磁珠孵育，靶蛋白得率最高。直接法：磁珠先和抗体结合，再加入抗原孵育，对于表达丰度高的蛋白，两种方法差别不大，如果表达丰度低，要选择间接法获得更高的靶蛋白得率。希望这些小知识能帮助你更好地进行免疫沉淀实验！𐟧ꀀ

实验结果图缺失条带？可能原因及解决方法亲爱的实验小伙伴们，最近有不少小伙伴在问实验结果图中没有条带的问题，别担心，这里有一些可能的原因和解决方法供大家参考： 𐟔 可能原因及建议： 1️⃣ 一抗和二抗加错了，或者不匹配请仔细检查一抗和二抗是否加对，确保选择的是针对一抗来源种属的二抗。 2️⃣ 一抗浓度过低或蛋白浓度不足尝试使用新鲜的抗体；调整抗体浓度，避免重复使用。 3️⃣ 发光液失效或不灵敏使用新鲜的灵敏型发光液。 4️⃣ 转膜不充分或时间过长用丽春红染膜确认条带是否转至膜上，适当调整转膜时间和电流。 5️⃣ 封闭过度或洗脱过度减少封闭时间；减少洗膜时间，降低去垢剂浓度，建议使用不高于0.1%的温和去垢剂Tween-20。 6️⃣ 蛋白降解提取蛋白样本时加入蛋白酶抑制剂；处理样本时在冰上操作。 𐟤” 如果有更多问题，欢迎大家一起探讨！

BCA蛋白浓度测定法：从原理到操作步骤 𐟌ˆ 原理： BCA蛋白浓度测定法是基于改良的Lowry法，利用二喹啉酸（bicinchoninic acid）作为反应剂。这个方法结合了双缩脲反应和显色反应：在碱性介质中，蛋白质将Cu2+还原成Cu1+，然后使用含有二喹啉甲酸（BCA）的独特试剂，通过比色法检测Cu1+，具有高灵敏度和高选择性。显色物质是由两分子的BCA和一分子的亚铜离子螯合形成的紫色物质。 𐟌Ÿ 特点：优点：灵敏度高：检测浓度下限达到10/ml，最小检测蛋白量达到0.2，待测样品体积为1-20。操作简便：在碱性溶液中BCA比Folin试剂稳定，只需一种试剂即可完成检测。兼容性强：测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的去污剂等化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween-20，60，80。线性范围广：在20-1000/ml浓度范围内有良好的线性关系。显色速度快：相同的样品孵育较短时间即可进行吸光度测定。缺点：容易受到能与铜离子反应的螯合剂，例如EDTA，巯基乙醇以及蛋白质内半胱氨酸等的影响。 𐟓 步骤（视试剂盒而定）： 1️⃣ 蛋白标准品配制：室温完全溶解蛋白标准品，取20⵬ 5mg/ml BSA蛋白标准溶液用PBS溶液稀释至100⵬，使其终浓度为1.0 mg/ml。 2️⃣ 配制BSA标准测定溶液。 3️⃣ 工作液配制：将A液与B液按照50:1的比例混合，配成BCA工作液，并混匀。 4️⃣ 加样：将待测样本以适当体积加入并用PBS补足至20ul。 5️⃣ 孵育：向各孔中加入200⵬的工作液，混匀后37℃孵育30min，亦可室温放置2h。 6️⃣ 测定吸光度：测定562nm处的吸光度，记录数值，代入标曲计算浓度。 7️⃣ 绘制标准曲线计算样品浓度：新建一个Excel表格，将得到的标准品的吸光度按照下方表格排列，并按照试剂说明说输入相应标准品的浓度。选中标准品吸光度和浓度，点击“插入”，选择散点图。点击散点图的任意一点，右键选择添加趋势线；点击设置，趋势线选项选择“线性”，勾选“显示公式”和“显示R平方值”，即可得到标准曲线。计算样本浓度：代入公式直接计算即可，但要记得样本稀释倍数再回算回去。 𐟔 通过这些步骤，你可以准确地测定蛋白质的浓度，为后续的实验提供可靠的数据支持。

实验室缓冲液大揭秘！嘿，大家好！今天咱们来聊聊那些在实验室里让人傻傻分不清的缓冲液：TBS、TBST、PBS、PBST。相信很多小伙伴都有过这样的困惑吧？别担心，看完这篇文章，你一定能搞清楚它们的区别！ TBS（Tris缓冲盐水） 𐟌€ 首先，咱们来说说TBS。TBS其实就是Tris-HCl缓冲盐溶液的简称。它主要由Tris和NaCl组成。Tris提供缓冲能力，能保持溶液在弱碱性环境下稳定；而NaCl则负责调节渗透压，让它接近生理条件。TBS在免疫测定、免疫组织化学染色、原位杂交、Western blot等实验中可是个大明星，广泛用作洗涤缓冲液或抗体稀释剂。配方也很简单：每1000ml需要6.05克Tris base和85.0克NaCl，用HCl调整pH值到7.4-7.6。 PBS（磷酸盐缓冲液） 𐟌🊦Ž夸‹来是PBS。PBS是一种以磷酸盐为主要成分的缓冲溶液，主要用于维持生物样品或实验体系中的pH稳定和渗透压平衡。它的主要成分包括KH2PO4、Na2HPO4、NaCl，有时候还会加点KCl。PBS的pH值相对稳定，常用于细胞实验、免疫染色等作为缓冲液或者洗涤液。配方也很直观：每1000ml需要1.42克NaH2PO4、8.77克Na2HPO4和90.0克NaCl，用NaOH调整pH值到7.2-7.4。 TBST（含Tween 20的Tris缓冲盐水） 𐟧𔊧„𖥐Ž是TBST。TBST是在TBS的基础上添加了Tween 20这一成分而得到的缓冲溶液。Tween 20是一种非离子型表面活性剂，能增强洗涤效果。它在Western blot实验中特别有用，能去除非特异性结合的抗体。配方和TBS差不多，只是多加了一毫升Tween 20。 PBST（含Tween 20的磷酸盐缓冲液） 𐟌𜊦œ€后是PBST。PBST是在PBS的基础上添加了Tween-20而得到的混合溶液。它在生物化学实验中的洗涤步骤中非常有用，能去除未结合的试剂，降低背景噪声，提高实验结果的信噪比。配方也很简单：每1000ml PBS加上一毫升Tween-20。总结 𐟓 总的来说，这些缓冲液在生物化学实验中都有各自的作用，但它们都含有维持溶液等渗的NaCl成分。希望这篇文章能帮你搞清楚它们的区别，下次再也不怕搞混啦！如果你还有什么疑问，欢迎在评论区留言哦！𐟘Š

𐟔 解决His标签蛋白纯化杂带问题 𐟒ᠥ‘现His标签蛋白纯化跑胶有杂带？别担心，这里有解决方案！ 1️⃣ 如果His标签蛋白被部分降解，试试添加蛋白酶抑制剂（避免使用EDTA），保持低温操作，并缩短样品处理时间。 2️⃣ 在结合缓冲液中加入低浓度咪唑，如20-40mM，减少杂质与柱子的结合。 3️⃣ 若杂质与目的蛋白有相互作用，可在细胞破碎前加入去垢剂或还原剂，或在Wash buffer中提高去垢剂浓度，如2% TritonX-100或2% Tween 20，并添加甘油（20%以内）以破坏非特异性相互作用。同时，提高缓冲液的盐浓度至500 mM NaCl。 4️⃣ 使用线性咪唑浓度洗脱，缓冲液B设为500mM咪唑，浓度从0-100%逐步增加，洗脱10个柱体积。 5️⃣ 增加His标签长度至7-8个组氨酸，有助于提高纯化效率。 𐟎‰ 试试这些方法，让你的His标签蛋白纯化更加纯净！

pulldown结果怎么看 𐟔 GST-pull down实验是探索蛋白质间相互作用的重要方法，但进行时可能会遇到一些挑战。以下是针对常见问题的详细解答： 1️⃣ 𐟤” GST-pull down的优缺点是什么？ 𐟑 高灵敏度、高特异性，且检测范围广泛，操作简单经济。 𐟑Ž 但对于低含量抗原检测可能存在误差，且无法直接检测蛋白质结构和功能。 2️⃣ 𐟤𗢀♀️ 如何减少假阳性结果？ 𐟒ᠩ€š过添加非离子型洗涤剂和特定pH缓冲液来减少非特异性互作，并用Tween-20处理GST-beads。 3️⃣ 𐟤” 如何选择合适的阴性对照组？ 𐟒ᠩ€‰择不含目的蛋白的空GST蛋白作为对照组，以评估GST beads的特异性和排除假阳性。 4️⃣ 𐟌᯸ GST-pull down的温度和时间如何选择？ 𐟒ᠩ€š常在4℃下进行，时间为2-4小时，但具体条件可能因实验而异。 5️⃣ 𐟤” co-IP能验证互作，为何GST-pull down不能？ 𐟒ᠣo-IP在体内检测，可能捕捉到间接互作，而GST-pull down只能验证直接互作。

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