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科研日记:小鼠皮肤蛋白提取失败原因大揭秘 快三个月没跑WB了,结果一出来就给我这么大的“惊喜”,各种问题层出不穷,真是笑死我了。 样本来源:C57小鼠皮肤(1%SDS裂解,默克蛋白酶抑制剂,磷酸化酶抑制剂) 电泳参数:金斯瑞的预制胶,电泳80v 10min,120v 60min,转膜湿转250mA 60min 抗体比例:5%BSA封闭2小时,一抗GAPDH过夜(abcam 1:10000),二抗羊抗兔1小时(三鹰 1:10000),洗膜10分钟X3 样本是昨天提取的,除了转膜液,其他都是新配的。所有问题都集中在一张膜上,真是“教科书”级别的失败案例啊。 朋友们,快来讨论下可能的原因吧!
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